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牛核因子κB(NF-κB)ELISA檢測(cè)試劑盒需要注意的細(xì)節(jié)問(wèn)題

更新時(shí)間:2019-09-06點(diǎn)擊次數(shù):1091

牛核因子κBNF-κBELISA檢測(cè)試劑盒需要注意的細(xì)節(jié)問(wèn)題有哪些?

首先需要注意樣本處理細(xì)節(jié),下面是各種樣本具體處理時(shí)的細(xì)節(jié)。

1.  血清將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4過(guò)夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?20或-80保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.  血漿用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?20或-80保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3.  組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果),稱(chēng)重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測(cè)。

4.  細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:請(qǐng)1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注:標(biāo)本溶血會(huì)影響后檢測(cè)結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。

 

 

牛核因子κB(NF-κB)ELISA檢測(cè)試劑盒在操作的時(shí)候還有哪些需要注意的地方呢?

  • 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
  • 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過(guò)程中不要讓微孔干燥掉。
  • 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
  • 底物顯色液應(yīng)呈無(wú)色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
  • 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。
  • 在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
  • 平衡至室溫后再打開(kāi)密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
  • 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
  • 不能使用過(guò)期產(chǎn)品。
  • 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置

 

11.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。

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