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TECHNICAL ARTICLES豬瘟病毒阻斷ELISA抗體檢測試劑盒科研專用
【獸用名稱】
通 用 名 豬瘟病毒阻斷ELISA抗體檢測試劑盒
商 品 名 無
英 文 名 Blocking ELISA Kit For Detection of Antibodies to Classical Swine Fever Virus
漢語拼音 Zhuwenbingdu Zuduan ELISA Kangti Jiance Shijihe
【主要組分與含量】
組分 | 含量 | 含量 | 含量 |
(1)抗原包被板 | 1板 | 2板 | 5板 |
(2)陽性對照 | 1ml*1(藍(lán)蓋) | 1.5ml*1 | 2ml*1 |
(3)陰性對照 | 1ml*1(紅蓋) | 1.5ml*1 | 2ml*1 |
(4)酶標(biāo)記物 | 11ml*1(綠蓋) | 25ml*1 | 60ml*1 |
(5)樣品稀釋液 | 25ml*1(藍(lán)蓋) | 50ml*1 | 150ml*1 |
(6)20倍濃縮洗滌液 | 25ml*1 (黃蓋) | 50ml*1 | 150ml*1 |
(7)底物顯色液 | 11ml*1(棕蓋) | 20ml*1 | 50ml*1 |
(8)終止液 | 6ml*1 (紅蓋) | 11ml*1 | 26ml*1 |
(9)說明書 | 1份 | 1份 | 1份 |
【作用與用途】 用于檢測豬瘟病毒抗體。
【注意事項】
(1)實驗前,將試劑盒取出置25℃±3回溫,至少30分鐘,實驗完成后置2~8℃保存。
(2)若試劑盒陰陽性對照、酶標(biāo)記物出現(xiàn)少量懸浮物,屬正常現(xiàn)象。
(3)請在試劑盒規(guī)定的有效期內(nèi)使用;禁止非同批試劑盒混用。
(4)沒有用完的抗原包被板應(yīng)貯存在密封塑料袋內(nèi),置2~8℃存放。
(5)避免底物液暴露于強(qiáng)光,避免接觸氧化劑。
(6)濃縮洗滌液用蒸餾水或純水稀釋,如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶加熱使其溶解后再使用。
(7)嚴(yán)格按照操作程序,仔細(xì)的吸液、計時,充分洗滌,對于獲得精確的結(jié)果是非常必要的。
(8)使用血清稀釋板將所有待檢血清稀釋好,再進(jìn)行檢測。
【用法與判定】
1 用法
1.1 樣品準(zhǔn)備 取動物全血,待血液凝固后,4000r/min離心10分鐘,收集上清。或采集血液,待凝固后自然析出血清。血清應(yīng)清亮,無溶血。
1.2 樣品稀釋 在血清稀釋板中,用樣品稀釋液按1:1的比例稀釋待檢血清(例如:120μl樣品稀釋液中加120μl待檢血清);陰性、陽性對照不稀釋,直接使用。
1.3 洗滌液配制20倍濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫(20~25℃),搖動使沉淀溶解(建議在37℃水浴鍋中加熱至完quan溶解),然后用蒸餾水或純水作20倍稀釋,混勻(例如:10ml的濃縮洗滌液加上190ml純水)。稀釋好的洗滌液在2~8℃可以存放7日。
1.4 操作步驟
1.4.1 取抗原包被板(根據(jù)樣本多少,可拆開分次使用),每孔加入稀釋好的洗滌液300µl,不必靜置,棄掉孔中洗滌液,洗滌2次,最后一次拍干。每孔加入稀釋好的樣本100μl;另外設(shè)陽性對照、陰性對照各2孔,100μl/孔。置37℃孵育120分鐘。
1.4.2 棄去板中液體,每孔加入稀釋好的洗滌液300µl,不必靜置,棄掉孔中洗滌液,重復(fù)洗滌共計洗板5次,最后一次拍干。
1.4.3 每孔加入100μl酶結(jié)合物,輕微振蕩混勻。置37℃下孵育30分鐘。
1.4.4 棄去板中液體,洗滌5次,方法同1.4.2。
1.4.5 每孔加底物顯色液100µl,室溫(20~25℃)避光顯色10分鐘。
1.4.6 每孔加終止液50µl。10分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀測定并記錄各孔在630nm波長處的吸光度(OD)值(測定前輕輕振勻,勿溢出)。
2 判定
2.1 成立條件 在酶標(biāo)儀上測各孔OD630nm值,試驗成立條件是陰性對照的OD630nm平均值≥0.6,陽性對照的OD630nm平均值≤0.5
2.2 判定標(biāo)準(zhǔn) S為樣品孔OD630nm值,N為陰性對照OD630nm平均值。
阻斷率=(1-S/N)×100%
如果阻斷率<40%,判為豬瘟病毒抗體陰性;
如果阻斷率≥40%,判為豬瘟病毒抗體陽性。
【規(guī)格】96 孔/盒或192 孔/盒或480 孔/盒
【貯藏與有效期】 2~8℃保存,有效期為12個月。
僅供科研使用
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