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綿羊白細胞介素1 β(IL-1β)酶聯免疫分析試劑盒說明書下載

發布時間:2018/7/14點擊次數:1130

綿羊白細胞介素1 β(IL-1β)酶聯免疫分析試劑盒說明書下載

使用目的:

本試劑盒用于測定綿羊血清、血漿及相關液體樣本中白細胞介素 1β(IL-1β)含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中綿羊白細胞介素 1β(IL-1β)水平。用純化的

綿羊白細胞介素 1β(IL-1β)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次

加入白細胞介素 1β(IL-1β),再與 HRP 標記的白細胞介素 1β(IL-1β)抗體結合,形成

抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下

轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素 1β

(IL-1β)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算

樣品中綿羊白細胞介素 1β(IL-1β)濃度。

綿羊白細胞介素1 β(IL-1β)酶聯免疫分析試劑盒組成

1  30 倍濃縮洗滌液  20ml×1 瓶  7  終止液  6ml×1 瓶

2  酶標試劑  6ml×1 瓶  8  標準品(240 ng/L)  0.5ml×1 瓶

3  酶標包被板  12 孔×8 條  9  標準品稀釋液  1.5ml×1 瓶

4  樣品稀釋液  6ml×1 瓶  10  說明書  1 份

5  顯色劑 A 液  6ml×1 瓶  11  封板膜  2 張

6  顯色劑 B 液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個

標本要求

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能

馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

綿羊白細胞介素1 β(IL-1β)酶聯免疫分析試劑盒操作步驟

1.  標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀

釋。

120 ng/L  5 號標準品  150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液

60 ng/L  4 號標準品  150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

30 ng/L  3 號標準品  150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

15 ng/L  2 號標準品  150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

7.5 ng/L  1 號標準品  150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

2.  加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、

待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,

然后再加待測樣品 10µl(樣品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡

量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3.  溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.  配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.  洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此

重復 5 次,拍干。

6.  加酶:每孔加入酶標試劑 50µl,空白孔除外。

7.  溫育:操作同 3。

8.  洗滌:操作同 5。

9.  顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

15 分鐘.

10. 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止

液后 15 分鐘以內進行。

操作程序總結:

計算

以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的

OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與 OD 值計算出標

準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,

即為樣品的實際濃度。

綿羊白細胞介素1 β(IL-1β)酶聯免疫分析試劑盒注意事項

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未

用完,板條應裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間zui

控制在 5 分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標準曲線,zui好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD 值

大于標準品孔孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定,計

算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6 個月

 

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